Au théâtre, il joue sous la direction de Roger Planchon, de Jorge Lavelli, de Patrice Chéreau, de Claude Régy, entre autres.
En 1982, il entre à la Comédie-Française, et devient, en 2002, sociétaire honoraire. Il y joue un grand répertoire de pièces diverses : Mère Courage et ses enfants de Bertolt Brecht, Dom Juan de Molière, Le Balcon de Jean Genet, Les Estivants de Maxime Gorki ou encore Elle est là de Nathalie Sarraute.
Il joue avec Dominique Pitoiset dans La Tempête de Shakespeare, avec Yves Beaunesne dans Oncle Vania d'Anton Tchekhov et dans La Princesse Maleine de Maurice Maeterlinck.
Au cinéma et la télévision, il joue sous la direction de Jean-Jacques Beineix dans Diva, de Patrice Chéreau dans L'Homme blessé, de Jean-Paul Rappeneau dans Cyrano de Bergerac.
Au cours de sa carrière, il reçoit les distinctions honorifiques de Chevalier de la Légion d'honneur, de l'Ordre national du Mérite, et du Commandeur dans l'Ordre des Arts et Lettres. En 2007, Roland Bertin joue dans L'Ignorant et le Fou de Thomas Bernhard au Théâtre de l'Athénée-Louis-Jouvet.
Le 16 janvier 2008, il est hospitalisé à l'hôpital Pontchaillou de Rennes à la suite d'un malaise après 45 minutes de représentation de la tragédie de Shakespeare : Coriolan. En 2009, il est nommé pour le molière du second rôle pour son interprétation dans cette même pièce.
