John Hopkins est né à Luton et a étudié l'anglais à l'Université de Leeds de 1993 à 1996. Pendant ses études de premier cycle, il a rejoint le groupe de théâtre de l'université et a joué dans plusieurs pièces, remportant finalement le prix du meilleur jeune acteur du "Sunday Times" pour sa performance dans "A Short Play About Sex and Death". Fort de ces références théâtrales, John a été admis à la Royal Academy of Dramatic Arts de Londres, dont il a obtenu son diplôme en 2000. Presque immédiatement, il a été recruté par la prestigieuse Royal Shakespeare Company, avec laquelle il a joué sa première saison de répertoire de 2001 à 2002. À cette époque, son charme lui a valu des propositions télévisées et, après des petits rôles dans "Love in a Cold Climate" et "Trial and Retribution 7", il s'est vu proposer et a accepté le rôle pour lequel il est surtout connu du grand public, celui du sergent Scott dans la série policière britannique de plus en plus prévisible mais populaire Midsomer Murders (1997). Il faut lui en donner le mérite : il a quitté la série après la saison 2004-2005 et est revenu à la Royal Shakespeare Company pour la saison 2006-2007 à Londres et Stratford-upon-Avon, jouant César face à Patrick Stewart dans "Antony and Cleopatra". Plus récemment, ses rôles au théâtre ont inclus Richard Hannay dans la version comique à quatre personnages de "The 39 Steps" de Patrick Barlow, Richard Ier dans la nouvelle pièce "Holy Warriors" au Globe de Shakespeare, et Bénédict dans "Much Ado About Nothing", une performance que The Guardian a qualifiée de "confirmant Hopkins comme l'un de nos meilleurs acteurs shakespeariens". À la télévision, il a incarné un méchant dans "Stan Lee's Lucky Man" et a joué Sir Francis Basset pendant deux séries du drame BBC "Poldark". Dans un article du Times de Londres en 2020, il a été nommé parmi les "10 meilleurs acteurs britanniques en scène actuellement".
