Issue de la troupe du Groundlings Theater de Los Angeles, Maya Rudolph se fait connaître dès les années 2000 : elle tourne dans le dernier film réalisé par Robert Altman, The Last Show, ainsi que dans Idiocracy de Mike Judge.
Si elle était apparue auparavant dans Duos d'un jour, 1 duplex pour 3 ou La légende de Ron Burgundy, elle prête par la suite sa voix au personnage de Rapunzel dans Shrek le troisième. Sollicitée par Sam Mendes, le réalisateur d'American Beauty, elle joue en 2009 dans Away we go (This must be the place), comédie douce amère dans laquelle elle tourne avec John Krasinski.
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