Reginald Sheffield est né Matthew Reginald Sheffield Cassan dans le quartier de St. George's, Hanover Square à Londres, de Matthew Sheffield Cassan et Alice Mary Field. Il avait un frère, Edward Sheffield Cassan, et une sœur, Flora Kathleen Sheffield Cassan, qui devint une actrice connue sous le nom de Flora Sheffield.
Son père était né en Irlande et sa mère en Angleterre. Ils se sont mariés à Londres en 1892. Matthew décéda alors que Reginald n'avait que neuf ans. En 1913, Reginald (crédité sous le nom d'Eric Desmond) apparut dans David Copperfield. En 1914, Alice Sheffield et ses enfants émigrèrent aux États-Unis, où ils s'installèrent à Queens, New York. Reginald joua au théâtre et au cinéma. Tandis que sa sœur Flora était actrice, son frère Edward travaillait comme comptable dans une banque et devint plus tard agent théâtral.
Les performances de Sheffield à Broadway, créditées sous le nom de Reggie Sheffield, incluent Evidence (1914), dans laquelle sa mère apparut également, The Merry Wives of Windsor (1916), If (1917), The Betrothal (1918) et Helena's Boys (1924). Ses performances créditées sous le nom de Reginald Sheffield incluent Youth (1920), The Way Things Happen (1924), Hay Fever (1925), Slaves All (1926), Soldiers and Women (1929) et Dear Old England (1930).
Reginald Sheffield s'est marié en 1927 avec Louise Van Loon (21 janvier 1905 – 14 avril 1987), une diplômée du Vassar College née à New York, ayant reçu une éducation en arts libéraux. Le couple eut trois enfants : Mary Alice Sheffield Cassan (née en 1928), Jon Matthew Sheffield Cassan (11 avril 1931 – 15 octobre 2010) (alias l'acteur Johnny Sheffield) et William Hart Sheffield Cassan (15 juillet 1935 – 12 décembre 2010) (l'acteur Billy Sheffield).
Alors que la production cinématographique se délocalisait de plus en plus vers le sud de la Californie, Sheffield et sa femme voyagèrent régulièrement entre New York et Los Angeles. Après plusieurs années, ils s'installèrent définitivement sur la côte ouest.
Formé au théâtre, Sheffield fit aisément la transition du cinéma muet aux films parlants. C'était un acteur en activité qui marqua les esprits dans de nombreux rôles secondaires et de composition, et il joua aux côtés de quelques-unes des plus grandes vedettes de cinéma de l'époque, notamment Constance Bennett, William Powell, George Arliss, Loretta Young, Gary Cooper, Errol Flynn, Rosalind Russell, Cary Grant et Joan Fontaine.
En 1954, il commença à incarner le professeur Mayberry dans la série télévisée Rocky Jones, Space Ranger. Et après que son fils Johnny Sheffield, connu pour ses rôles dans les films de Tarzan puis de Bomba, eut tourné son dernier film de jungle en 1955, Reginald créa, produisit et réalisa un pilote pour une série télévisée, Bantu, the Zebra Boy, mais aucun sponsor ne fut trouvé et la série ne fut jamais produite en tant que série hebdomadaire.
Sheffield joua dans les deux versions, 1938 et 1958, du film Le Flibustier de Cecil B. DeMille, cette dernière étant sa dernière apparition à l'écran.
Reginald Sheffield décéda le 8 décembre 1957 à son domicile à Pacific Palisades, en Californie, à l'âge de 56 ans.
