Stefano DiMatteo, originaire de Toronto en Ontario, a commencé sa carrière dans sa ville natale, mais il a senti le besoin de changer d'environnement, ce qui l'a amené à Vancouver où il a pu étudier son art à la Lyric School for Acting, tout en poursuivant sa carrière d'acteur à temps plein. À Vancouver, Stefano a joué un rôle de soutien dans Cold Squad en tant que Manuel Diaz, un homme soupçonné d'avoir tué sa petite amie. Il s'est rapidement retrouvé dans le pilote de la série télévisée à succès Stargate Atlantis, jouant le rôle de Toran aux côtés de Rachel Luttrel, puis dans le film Lizzie McGuire avec Hilary Duff et dans Riddick : La Chronique avec Vin Diesel.
Stefano DiMatteo a récemment terminé un rôle en vedette dans le film d'horreur à venir Survival of the Dead, le dernier volet de la série des Morts vivants de George A. Romero, dans lequel il incarne un soldat de la Garde nationale qui court partout sur l'île de Plum, au large de la côte atlantique, essayant de garder les morts morts, aux côtés d'Alan Van Sprang (The Tudors), Devon Bostick (Adoration) et Kenneth Welsh (Adoration). Le film a récemment eu sa première mondiale au 66e Festival de Venise, où DiMatteo peut être vu aux côtés de George A. Romero sur le tapis rouge en train de promouvoir le film auprès de fans passionnés.
Après avoir terminé le tournage de Survival of the Dead, le jeune acteur prometteur est retourné directement au travail dans un rôle de soutien, aux côtés de Judd Nelson (The Breakfast Club) dans la suite très attendue du film culte original de Troy Duffy, Boondocks Saints. Boondocks Saints: All Saints Day, est prévu pour une sortie en salles en novembre 2009, où Judd Nelson incarne Concezio Yakavetta, le nouveau Don des Dons, et DiMatteo joue son Capo, complotant et manigançant pour trouver la meilleure façon de faire face à la résurgence des Saints. Il y aura des armes, de très grosses armes!
Stefano a également partagé l'écran avec Matt Lanter (Beverly Hills 90210) dans un rôle en vedette du troisième volet de la trilogie Cutting Edge, Cutting Edge: Chasing the Dream. DiMatteo joue l'entraîneur ambitieux de Lanter qui convoite la médaille d'or olympique presque autant que les deux athlètes qu'il entraîne pour la remporter. Cutting Edge, rendu célèbre à l'origine par D.B. Sweeney (Eight Men Out) et Moira Kelly (Chaplin) en 1992, semble avoir trouvé un nouveau foyer auprès d'une nouvelle génération de fans avec la résurgence des films Cutting Edge. Cherchez-le maintenant dans les magasins de vidéo.
Stefano travaille sur Crash & Burn, une nouvelle série télévisée créée par Whizbang Productions (Paul Gross), prévue pour être diffusée sur Showcase en janvier 2010, où il a un rôle récurrent en tant que personnage Arlindo.
En 2008, le premier long métrage de réalisation de Stefano DiMatteo, Communication Breakdown, une comédie romantique sur les épreuves et tribulations des rencontres au 21e siècle, a eu sa première mondiale au Festival du film canadien, suivi d'une projection au prestigieux Festival du film de Maui et finalement en remportant un prix du meilleur court métrage au Festival MIFF.