Evgueni Samoïlov est né en 1912 à Saint-Petersbourg dans une famille d'ouvrier, et s'est éteint en 2006. Ses deux parents sont morts pendant le blocus de la ville par les allemands. En 1928, alors qu'il est encore lycéen, il commence à étudier l'art dramatique en suivant des cours du soir. Il continue sa formation d'acteur dans l'école polytechnique des arts de Leningrad (le nom de Saint-Petersbourg entre 1925 et 1991).
Samoïlov commence sa carrière professionnelle dans le Théâtre de la comédie de Leningrad. En 1934 Vsewolod Meyerhold lui a proposé de rejoindre sa troupe à Moscou, où il a commencé à jouer les rôles de héros romantiques. En 1938 le théâtre de Meyerhold (ГосТИМ) a été fermé.
Dès 1936, avec la permission de Meyerhold, Samoïlov débute au cinéma chez Igor Savtchenko dans le film Une rencontre fortuite (Случайная встреча). En 1937 Alexandre Dovjenko le choisit pour jouer le rôle principal dans le film Chtchors (Щорс). Pour ce rôle Samoïlov reçoit le prix Staline. Avec les rôles de Koudriachov dans le film de Ivan Pyriev A six heures de soir après la guerre (В шесть часов вечера после войны) (1944), et de Koltchine dans le film de Constantin Youdine Quatre cœurs (Сердца четырех) (1941/1944) Samoïlov devient un des acteurs les plus populaires de l'Union soviétique.
De 1943 à 1967 il travaille dans le Théâtre de la Révolution sous la direction d'Okhlopkov (en 1954 le Théâtre a reçu le nom de Vladimir Maïakovski). En 1968 après la disparition d'Okhlopkov il rejoint la troupe du Théâtre Maly (Малый театр). Samoïlov est décoré plusieurs fois par l'Etat.
