Après une formation au C.N.S.A.D. (Conservatoire Supérieure d'Art Dramatique) de 1988 à 1991, Florence Muller entame une ample carrière théâtrale sous la direction notamment de Daniel Mesguich (Le boulevard du boulevard de Gaston Portail), J. Y Lazennec (Anatole d'Arthur Schnitzler) ou Mario Gonzales (L'amour médecin de Molière).Avant tout comédienne rôdée aux planches et aux grands textes, elle tente, dès le début des années 90, l'aventure du cinéma auprès du prestigieux cinéaste américain Robert Altman qui lui confie le rôle de Rachel dans Vincent et Théo (1991). Ce coup d'essai n'est pourtant pas forcément suivi d'effet et Florence continue son parcours de théâtre, se ménageant quelques apparitions télévisuelles dans des séries populaires comme "Navarro".Le début des années 2000 est plus riche en expériences notamment au niveau des comédies populaires comme Bienvenue au gîte (2000), collaborant régulièrement avec certains membres de la troupe comique des Robin des bois dans Rrrrr (2004) ou Papa (réalisé par Maurice Barthélémy).Souvent utilisée dans des seconds rôles (Pars vite et reviens tard en 2007) ou en "guest" dans des séries policières ("Boulevard du palais", "Avocats et associés") elle est prisée de comiques comme Kad et Olivier pour lesquels elle apparaît régulièrement (Mais qui a tué Pamela Rose ?, Safari).En 2008, elle tourne dans un épisode du film à sketch Paris, je t'aime où elle rencontre Bruno Podalydès qui est séduit par sa technique et lui confie son premier rôle important : elle est la secrétaire "fil rouge" de son film-choral Bancs publics (Versailles Rive Droite) qui clôt, en 2009, la trilogie des gares versaillaises.
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