Après quelques apparitions au cinéma, Mark Ruffalo est révélé en 2001 par Tu peux compter sur moi de Kenneth Lonergan. Il donne ensuite la réplique à Robert Redford dans Le Dernier Château (2002) et à Nicolas Cage dans Windtalkers (2002).
Par après il se diversifie dans les genres du polar (Collateral - 2004; Zodiac - 2007), de la comédie romantique (Hôtesse à tout prix - 2003, Et si c'était vrai - 2005), ou du drame (We don't live here anymore -2001; Les Fous du roi - 2006)
En 2008, il donne la réplique à Julianne Moore et Danny Glover dans Blindness de Fernando Meireilles.
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